原创《阪崎肠杆菌盲样考核方法和步骤》：该文是关于阪崎肠杆菌论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
【摘 要】 国家食品药品监督管理局为了考核检验机构的检验能力,组织了阪崎肠杆菌的盲样考核.本文记录了检验阪崎肠杆菌的方法和步骤.
【关键词】 阪崎肠杆菌 盲样考核 方法
【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2017.09.007
1 阪崎肠杆菌的生物学性状
1.1 培养特征
阪崎肠杆菌为兼性厌氧菌,能在血平板培养基、琼脂培养基、脱氧胆酸琼脂、麦康凯琼脂培养基等多种培养基上生长繁殖,所需营养条件较低.
1.2 生化反应
阪崎肠杆菌和其它试验肠杆菌差异：阪崎肠杆菌缺少磷酰胺酶,-葡萄糖苷酶活性为阳性,其它试验菌如产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、成团肠杆菌为阴性.
鉴定阪崎肠杆菌指标：氧化酶阴性、吐温80脂酶阳性、D-山梨醇阴性、细胞外DNase阳性的 菌落.
1.3 抵抗力
阪崎肠杆菌不耐热,标准巴斯德消毒法即可杀死该菌,但其胞内含海藻糖酶较高,因此对渗透压和干燥的耐受力强于大肠埃希菌、沙门菌等其他肠道菌.
1.4 增殖能力
阪崎肠杆菌在6℃,21℃,37℃倍增时间分别是13.7h,1.7h,19min～21min.危险性评估：25℃培养6h比对照（本底样品）危险性增加30倍；10h增加30000倍.婴儿配方奶粉中即使极微量的阪崎肠杆菌污染也有可能在食用前储藏期、甚至冲调期大量繁殖.因此严格管理婴儿配方奶粉的加工制作及储存过程是杜绝其危害的重要环节.
1.5 毒力
阪崎肠杆菌不同菌株的毒力不同,分为致病菌及非致病菌.某些菌株不能在胃酸环境中存活.现阶段,针对阪崎肠杆菌的毒力因子及致病性的相关研究并不透彻,还需广泛大量研究.
2 阪崎肠杆菌的生态分布
2.1 婴儿配方奶粉的污染
阪崎腸杆菌的来源现不十分明确,多数科学家认为婴儿配方奶粉的污染是其主要来源.
2.2 污染环节
婴儿配方奶粉经标准巴斯德消毒可有效杀死阪崎肠杆菌.因此,婴儿配方奶粉中的阪崎肠杆菌的污染应该是来自配方粉巴斯德消毒后存放、后期添加热敏感微量元素的过程中.
有报道,在奶粉、巧克力、谷类、马铃薯粉、面食加工厂都曾经检测出阪崎肠杆菌,说明该菌分布较为广泛,因此,如何加强对以上食品制作、加工及存储环境的监管还需要相关律法的支持及监管部门的有效执行.
3 阪崎肠杆菌盲样考核的方法和步骤
2016年7月初接到国家食品药品监督管理局组织的阪崎肠杆菌盲样考核样品.包括10个西林瓶和10个奶粉样品.
3.1 样品接收
样品正常：10个西林瓶和10个奶粉样品保存完整,编号清晰.编号分别为CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10.确认签收后按照GB 4789.40-2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 阪崎肠杆菌检验》开始样品的检验.
3.2 检验步骤
3.2.1 第一天：前增菌
在生物安全柜内将阪崎肠杆菌样品的西林瓶打开,取44℃的900mL灭菌BPW增菌液到无菌均质袋中,并加入西林瓶内白色小球,溶解充分.然后在上述BPW增菌液中加入和西林瓶编码相同的奶粉样品,充分混匀.将阪崎肠杆菌样品和相同编号的奶粉样品混合,分别编号CODE1、CODE2、CODE3、CODE4、CODE5、 CODE6、CODE7、CODE8、CODE9、CODE10.编号后置于36℃的电热恒温培养箱内培养18h.
3.3.2 第二天：增菌
按照标准每个样品移取1mL接种于10mL（mLST-Vm）肉汤,44℃培养24h.
3.3.3 第三天：分离
取混匀增菌培养物1环,分别划线接种于两个培养基平板,同时将阪崎肠杆菌阳性菌株和阴性对照菌株大肠埃希菌接种显色培养基.放入36℃的电热恒温培养箱内培养24h.
阪崎肠杆菌显色培养基上可疑样品菌落特征：CODE2、CODE6、CODE8：菌落呈蓝绿色和无色两种.阳性对照中菌落状态：菌落呈蓝绿色.根据阪崎肠杆菌在阪崎肠杆菌显色培养基上的菌落特征,初步判定CODE2、CODE6、CODE8中存在阪崎肠杆菌.
3.3.4 第四、五天：继续分离
从CODE2、CODE6、CODE8板上挑取5个可疑菌落,划线接种于TSA平板.放入25℃的电热恒温培养箱内培养48h.
3.3.5 第六天：鉴定
自TSA平板上直接挑取 可疑菌落,进行生化鉴定.本实验室选用的是北京陆桥的阪崎肠杆菌干制生化鉴定试剂盒.批号：150113,货号：DBI-02.放入36℃的电热恒温培养箱内培养24h.CODE2、CODE6、CODE8生化鉴定结果和阳性对照一致.
3.3.6 检测结果
综合形态学鉴定和生化鉴定,得出本次样品检测结果：CODE2、CODE6、CODE8检出阪崎肠杆菌,CODE1、CODE3、CODE4、CODE5、CODE7、CODE9、CODE10未检出阪崎肠杆菌.
作者简介
高元,研究生,中级职称,现任锦州市产品质量监督检验所微生物室主任.
刘畅,本科,中级职称,现任锦州市产品质量监督检验所中心检验部副部长.
柏杨杨,本科,现任锦州市产品质量监督检验所微生物室检验员.
阪崎肠杆菌论文参考资料：
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