原创《桑青枯雷尔氏菌gspG和gspK基因获取和生物信息学分析》：该文是关于桑青论文范文，为你的论文写作提供相关论文资料参考。
摘 要： gsp G和gsp K参和青枯雷尔氏菌Ⅱ型分泌系统周质复合体的形成.本研究以桑青枯雷尔氏菌MR111为材料,利用PCR扩增和DNA测序技术成功获得其gsp G和gsp K基因438 bp和843 bp的序列,在线BLAST分析两个基因编码蛋白和其它青枯雷尔氏菌同源区域的相似性在90%以上.在线CDD分析两个蛋白除分别含有典型的T2SG和T2SK以及N端主要由亮氨酸和丙氨酸组成的分泌型信号肽外,gsp G还含Ⅳ型分泌系统的“Ⅳ_pilin_GFxxxE”结构,而在gsp K中则出现了重复的“GIQSTE”序列,该序列在雷尔氏菌属中高度保守.
关键词：桑树；青枯雷尔氏菌；Ⅱ型分泌系统；gsp基因
中图分类号：S432.4+2文献标识号：A文章编号：1001-4942（2015）03-0009-04
Acquisition and Bioinformatics Analysis of gsp G and gsp K Genes
of Ralstonia solanacearum from Mulberry
Zhuo Su, Kong Weiqing*
（College of Agriculture and Life Sciences, Ankang University/Key Sericultural Laboratory of Shaanxi, Ankang 725099, China）
Abstractgsp G and gsp K genes are involved in the formation of periplasmic complex of Ralstonia solanacearum type Ⅱ secretion system. The sequences of gsp G and gsp K genes of Ralstonia solanacearum strain MR111 with 438 bp and 843 bp in length respectively were obtained from mulberry by PCR amplication and DNA sequencing technology. By online BLAST analysis, the similarity of the 2 genes with the homologous genes from other R. solanacearum species were both over 90%. There were typical functional structure of T2SG and T2SK, and secretory signal peptide composed mainly by leucine and alanine in the N-end in the 2 genes, respectively. A type Ⅳ secretion system “Ⅳ_pilin_GFxxxE” structure was found in gsp G, and a repeat sequence “GIQSTE” was found in gsp K. This repeat sequence was highly conserved in R. solanacearum.
Key wordsMulberry； Ralstonia solanacearum； Type Ⅱ secretion system； gsp gene
植物病原细菌通过泌出毒性因子和各种酶类和寄主植物蛋白进行互作完成其侵染过程,并使寄主植物产生病斑、枯萎等病症[1].目前病原细菌主要存在4种类型的分泌系统,Ⅰ型分泌系统主要分泌蛋白酶、毒素、脂肪酶等[2]；Ⅲ型分泌系统通过干扰抑制植物防御反应、调节寄主细胞的生理过程,帮助其对寄主的侵染,这两种分泌系统均是直接将底物蛋白从细胞质分泌到胞外[3]；Ⅳ型分泌系统被认为是接触依赖性系统,类似一个大的菌毛结构,横跨内外膜,使蛋白和大分子输出、靶定寄主细胞[4]；Ⅱ型分泌系统则主要分泌淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶以及细胞毒素等,降解植物细胞壁并产生大量的胞外多糖,使植株导管阻塞,植物体内水分的运输受到阻碍,或引起过高的静水力学压力,导致导管破裂,最终引起植株萎蔫[5].
青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）能单独存活于土壤并在其中繁殖,可以从次生根的根冠部位直接侵入植物,致病性、致病机理复杂[6].由该菌引起的植物青枯病可危害大姜等多种植物,是一种危害严重的土传性细菌维管束病害[7].青枯雷尔氏菌Ⅱ型分泌系统的中心由分泌途径转膜蛋白（general secretory pathway transmembrane protein,gsp）基因簇共12个蛋白gsp C～N组成,呈“致病岛”的形式排列在基因组上[8].其中很多蛋白和Ⅳ型分泌系统的菌毛合成中的蛋白有明显的序列相似性,尤其gsp G、H、I、J和K 5个蛋白和菌毛蛋白有高相似性,被称为“类菌毛亚基”,这5个蛋白还可能在周质中形成复合体,和细菌的外膜孔直接接触,将蛋白泌出胞外[9].本试验以桑青枯雷尔氏菌为研究对象,对其gsp G和gsp K基因及其特征进行分析研究,为细菌Ⅱ型分泌系统的结构和泌出机制的研究奠定基础.
1材料和方法
1.1试验材料
供试菌株：桑青枯雷尔氏菌MR111,由本实验室保存.
1.2基因组DNA的提取和gsp基因的扩增
桑青枯雷尔氏菌的培养在26℃下进行,使用TTC固体培养基对保存菌株进行活化,SPA液体培养基对挑取的单菌落过夜振荡培养[10].后离心收集菌体,按细菌基因组DNA提取试剂盒（天根生化科技北京有限公司产品）说明提取培养的桑青枯雷尔氏菌的基因组DNA,并以此为模板,使用设计的基因扩增引物进行PCR扩增.引物序列分别为：gsp G的引物序列为GF：5′-ATGATGCAAGGCCAAC-3′；GR：5′- CATTGTCCCAGTTGCC-3′；gsp K的引物序列分别为KF：5′-CGGGGCTCTGACATGA-3′；KR：5′-CCGAGGGGTATTGTGCC-3′.PCR反应程序为：94℃预变性5 min；94℃变性30 s,55℃退火45 s,72℃延伸1 min,30个循环；72℃终延伸10 min.PCR扩增产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳和回收纯化,送上海生工武汉测序部进行测序.
桑青论文参考资料：
结论：桑青枯雷尔氏菌gspG和gspK基因获取和生物信息学分析为大学硕士与本科桑青毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写桑青和柳媛什么电视剧方面论文范文。
