原创《食品检验中乳酸菌鉴定方法》：关于免费乳酸菌论文范文在这里免费下载与阅读,为您的乳酸菌相关论文写作提供资料。
据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》标准所示,乳酸菌（lactic acid bacteria,LAB）主要有乳杆菌、链球菌以及双歧杆菌三种菌属,并在食品、药品中广泛存在.为响应国家对食品安全的监管,本文特从不同角度鉴定食品中的乳酸菌菌种水平,详细研究过程如下：
资料和方法
一般资料.本次研究所有菌种均采自某市微生物菌种保藏中心,共计15株.其中乳酸杆菌6株,双歧杆菌7株,链球菌2株.
鉴定仪器：（1）API鉴定系统、API 50 CHL板条、API 20A 板条（生产厂家：法國生物梅里埃公司）；（2）RP耗材样品制备包（生产厂家：美国杜邦公司）；（3）生化管（生产厂家：杭州滨和微生物）；（4）Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统（生产厂家：美国Dupont公司）；（5）Quantity One紫外成像仪、电泳仪（生产厂家：美国BioRad公司）；（6）Veritii PCR扩增仪（生产厂家：美国ABI公司）,体积为50μL[2].
鉴定试剂：（1）细菌基因组DNA提取试剂盒（生产厂家：北京天根生物）；（2）DNA Marker、PCR缓冲体系（缓冲液5μL,含MgCl2）以及rTaqDNA聚合酶（生产厂家：大连宝生物工程有限公司）0.25μL；（3）正向引物27F（5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’）、反向引物1492R（5’-TACGGCTACCTGTTACTT-3’）各200pmol/L.
鉴定方法.染色镜检：根据《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》中乳酸菌的生化反应指标,筛选单菌落革兰染色镜检.根据《食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定》检验双歧杆菌.
API鉴定：乳酸杆菌由API 50 CHL板条进行鉴定,双歧杆菌由API 20A 板条进行鉴定.
分析法鉴定：（1）16S rRNA基因序列分析法鉴定：由DNA提取试剂盒提取单菌落细菌基因组DNA,100℃热盖,95℃持续变性1min,56℃退火30s,72℃延伸90s,PCR循环共30个；72℃延伸10min；采用1.5%琼脂糖凝胶电泳PCR产物,利用紫外凝胶成像分析仪观察电泳结果,然后通过Clustalw软件对测序结果加以分析,并通过GenBank数据库行BLAST对比.（2）RiboPrinter指纹图谱分析法鉴定：将单菌落悬浮于缓冲液内,并作95℃处理,随即加入裂解液A、B 5μL,然后采用Riboprinter全自动微生物基因指纹鉴定系统进行鉴定.
结果
染色镜检.鉴定结果显示,1株乳酸杆菌和1株链球菌的生化反应不符合《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》标准,但5株乳酸杆菌和1株链球菌的生化反应符合标准.6株双歧杆菌的生化反应不符合标准,仅1例完全符合.如图所示,所有菌株均为革兰阳性菌,无芽孢.
API鉴定.4株乳杆菌鉴定结果显示“类干酪乳杆菌干酪亚种”,未达到“种”水平.2株双歧杆菌鉴定结果显示“内放线菌”,未达到“属”水平；4株双歧杆菌鉴定结果显示“双歧杆菌1”,未达到“种”水平.2株乳杆菌、2株链球菌以及1株双歧杆菌鉴定结果均达到“种”水平.
分析法鉴定.16S rRNA基因序列分析法鉴定：15株中12株鉴定结果达到“种”或“亚种”水平,但3例未达到.RiboPrinter指纹图谱分析法鉴定：15株中11株鉴定结果达到“种”或“亚种”水平,3例未达到,1例未能鉴定.
讨论
《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》指出,菌株不同,其生理生化特征存在明显差异,因此本文结果显示6株双歧杆菌的生化反应不符合标准,且API鉴定结果显示15株中10株仅达到“属”水平.
而分析法鉴定结果相对理想,比如16S rRNA基因序列分析法和RiboPrinter指纹图谱分析法通过PCR对DN 段加以选择,不受培养条件限制,其鉴定结果如本文所示：15株中11株鉴定结果达到“种”或“亚种”水平.综合以上三种鉴定方法可知,参照《食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验》和《食品安全国家标准食品微生物学检验双歧杆菌的鉴定》的染色镜检虽具有一定乳杆菌、链球菌的鉴定能力,但双歧杆菌的鉴定水平不足；而API对三种菌属的鉴定能力基本一致,但整体水平相对较弱,无法达到“种”水平；相较以上两种方法,分析法鉴定既符合国家标准,同时又对API鉴定进行了有效补充.
综上所述,在食品检验中,分析法鉴定水平最高,为食品安全提供有力保障,值得大力推广.
乳酸菌论文参考资料：
结论：食品检验中乳酸菌鉴定方法为关于本文可作为相关专业乳酸菌论文写作研究的大学硕士与本科毕业论文乳酸菌饮料排名论文开题报告范文和职称论文参考文献资料。
