原创《云香水仙NAC基因克隆表达分析》：关于免费基因克隆论文范文在这里免费下载与阅读,为您的基因克隆相关论文写作提供资料。
摘 要 从‘云香’水仙转录组文库中筛选出1条NAC基因序列,采用PCR技术克隆得到其cDNA序列.序列分析表明,该NAC基因包含822 bp的开放阅读框,编码273个氨基酸,分子量30 903.9 u,命名为NtNAC3153（GenBank登录号：KU375569）.理化性质分析和多重序列比对显示,NtNAC3153蛋白是一个无跨膜区域的亲水性蛋白,在N端具有一段保守结构域.系统进化树分析表明,NtNAC3153和同为单子叶植物的小果野芭蕉MaNAC、二穗短柄草BdNAC和小米SiNAC亲缘关系最近.实时荧光定量PCR分析显示,NtNAC3153基因能够被ABA、盐胁迫和高温诱导表达.研究表明：NtNAC3153可能参和‘云香’水仙的抗逆调控机制.
关键词 ‘云香’水仙；NAC转录因子；基因克隆；序列分析；非生物胁迫
中图分类号：S682.21 文献标识码 A
Abstract A sequence of one NAC gene from‘Yunxiang’transcriptome library was cloned using PCR technology. Sequence analysis indicates that the cDNA of NAC, named NtNAC3153（GenBank accession number： KU375569）, contained an open reading frame of length 822 bp（encoding 273 amino acids, molecular weight： 30.903 9 ku）. Physiochemical properties analysis and multiple sequence alignment showed that NtNAC3153 protein was a hydrophilic protein which was free of trans-membrane region and had a conserved N-terminal domain. Phylogenetic analysis indicated that the NtNAC3153 had the closest relationship with Musa acuminata MaNAC, Brachypodium distachyon BdNAC and Setaria italica SiNAC. Real-time PCR analysis showed that the expression of NtNAC3153 gene could be induced by ABA, salt stress and high temperatures. NtNAC3153 may be involved in the regulation of resistance mechanisms of‘Yunxiang’.
Key words ‘Yunxiang’； NAC transcription factor； cloning； sequence analysis； abiotic stress
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.02.020
NAC轉录因子是植物所特有的最大的转录因子家族之一[1],在陆生植物中分布广泛.NAC家族的命名起源于矮牵牛（Petunia hybrida）NAM、拟南芥（Arabidoposis thaliana）ATAF1、ATAF2和CUC2基因[2-3].目前,已在拟南芥、水稻、大麦、小麦、玉米和大豆等多种植物中分离得到NAC家族基因[4-8].NAC转录因子主要在高等植物生长发育和胁迫应答中发挥作用,参和调控相关结构基因的表达[9-10].近年来,大量关于NAC基因参和胁迫应答的研究相继被报道[11-14],Yu Xingwang等[11]将鹰嘴豆CarNAC4基因转入拟南芥中进行研究,发现CarNAC4转录因子增强了拟南芥的抗旱性和抗盐性；Liu Guanze等[12]将水稻SNAC1基因转入棉花中进行研究,发现过量表达水稻SNAC1基因能够增加根系生长和降低蒸腾速率,从而增强了转基因棉花的抗旱性和抗盐性；Xu Zhongyang等[14]将小麦TaNAC29基因转入拟南芥中,发现TaNAC29通过增强抗氧化系统和参和调控非生物胁迫相关信号途径来减少H2O2的积累和对细胞膜的伤害,从而增加了转基因拟南芥的抗盐性.由此可见,NAC转录因子在植物的胁迫应答反应中起着十分重要的作用,但目前为止,对其分子机制的研究报道主要集中在模式植物和粮食作物上,因此进一步开展NAC转录因子在园艺作物中的研究具有非常重要的意义.
‘云香’水仙（Narcissus tazetta var. chinesis‘Yunxiang’）是福建农林大学园艺植物遗传育种研究所培育出的一个具有自主知识产权的水仙新品种[15],和传统中国水仙相比,植株大而健壮,鳞球较大且紧实,花期长,花香浓郁,抗病性强,在市场竞争中具有很大的优势.本研究从‘云香’水仙不同开花时期花瓣转录组文库中筛选出一个差异表达的NAC基因,在NCBI上进行Blast比对,初步推测其可能和抗性相关,进而对其进行克隆、生物信息学分析和抗性表达分析,研究该基因和‘云香’水仙抗逆机制的关系,为该基因功能的后续研究奠定基础,为水仙抗性新品种的培育提供分子辅助育种资料.
1 材料和方法
1.1 材料
试验使用的‘云香’水仙为大小一致,无病虫害的一年生子球,由福建农林大学园艺植物遗传育种研究所提供.
1.2 方法
1.2.1 总RNA的提取和反转录 使用多糖多酚植物总RNA快速提取试剂盒（百泰克公司）提取‘云香’水仙的总RNA.1%琼脂糖凝胶电泳分析RNA条带的清晰度、完整性,将质量完好的RNA置于
基因克隆论文参考资料：
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