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摘 要 对40份芥蓝材料进行游离小孢子培养及植株再生研究.结果表明：不同基因型间胚状体诱导率差异显著,其中只有红脚黄花芥蓝×612、孤老种、黄花芥蓝、绿宝、香港中花芥蓝产生胚状体；日照时间为11～12 h的供试植株的胚状体诱导率是日照时间为5～6 h的3～7倍；采用单核靠边期至双核早期的小孢子进行胚状体诱导效果最佳,此时花蕾大小为3.0～4.5 mm；在32.5 ℃下高温预处理小孢子24 h诱导效果最佳,其他温度时间组合条件下胚状体诱导率降低65%～100%.

关键词 芥蓝；游离小孢子培养；胚状体诱导率；植株再生

中图分类号 S635 文献标识码 A

Abstract Forty varieties of Chinese Kale were isolated for the study of microspore culture and plant regeneration. The results showed that： embryogenic rate among different genotypes was significantly different, among which only red foot flower kale × 612, the solitary species, yellow broccoli, Emerald and Hong Kong flower kale generated embryos； the embryogenic rate of the plant with 11-12 hours of sunshine was 3-7 times of those with 5-6 hours of sunshine； the late unicellular to early dual-core sidelined microspores had the best embryogenic rate when the bud size was 3.0-4.5 mm； the microspore with heat pretreatment at 32.5 ℃ for 24 hours had the best embryoid induction ability, while at other combinations of time and temperature, embryogenic rate decreased 65%-100%.

Key words Chinese Kale； Isolated microspore culture； Percentage of embryogenic； Plant regeneration

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.08.013

芥蓝（Brassica alboglabra）是十字花科芸薹属的甘蓝类蔬菜作物,是中国南方特色蔬菜作物之一[1].芥蓝通过常规杂交再经过连续自交纯化获得纯合品系通常需要5～8 a的时间[2].而采用游离小孢子培养技术获得基因型纯合的双单倍体只需要1～2 a时间,遗传上非常稳定,不仅可以缩短育种年限,而且可以提高基因组合选择效率.小孢子培养是指直接从花蕾或花药中获得游离的或新鲜的小孢子群体而进行培养,经由胚状体的诱导,再生出完整的单倍体植株,然后经过自发或诱发染色体加倍,成为正常可育、纯合的二倍体植株的过程[3].影响小孢子培养的因素很多,包括内在因素（如供体材料的生理状况和基因型等）和外部因素（如供体植株生长环境、取材时间、培养方法等）[4].张丽等[5]、朱允华等[6]、王超楠[7]分别研究了影响春白萝卜、菜心、小白菜游离小孢子胚状体产生的因素.王春丽等[8]、周志国等[9]对萝卜的游离小孢子培养技术进行了研究,栗根义等[10]、陈晓峰等[11]、张亚丽[12]对大白菜的游离小孢子培养技术进行了研究,均获得了纯合双单倍体植株.

国内外已有许多学者对十字花科芸薹属作物的游离小孢子培养开展了研究.Duijs等[13]和严准等[14]分别首次报道了抱子甘蓝和球茎甘蓝游离小孢子培养获得成功并得到再生植株.边立娜等[15]、佟智慧[4]分别对青花菜进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生和植株再生的各种因素.张娜等[16]、姜凤英[17]分别对黄花芥蓝、羽衣甘蓝胚状体发生及植株再生的影响因素进行了探究.对芥蓝小孢子培养成功的报道最早在1991年[18].何杭军等[19]、赵前程等[20]、Ferrie等[21]先后对芥蓝游离小孢子培养中诱导胚状体的发生及植株再生进行了探讨.利用游离小孢子培养技术有助于快速培养出纯合品系,但相对于其他芸薹属植物而言,目前关于芥蓝游离小孢子培养的报道比较少,还没有建立普遍适用的方法,无法直接将芥蓝种质资源中的优异种质资源进行挖掘和利用.因此,本研究在前人的基础上进行多个不同芥蓝品种游离小孢子培养试验,利用游离小孢子培养技术可创造芥蓝纯合双单倍体,加速芥蓝育种进程,缩短育种时间.

1 材料和方法

1.1 材料

红脚黄花芥蓝×612、凌桂迟芥蓝、孤老种、早35天芥蓝筷等40份优质丰产的不同芥蓝材料,于2014年9月28日播种于广东省农业科学院蔬菜研究所白云基地,如表1所示.

1.2 方法

1.2.1 培养基的种类和保存及小孢子培养过程

将B5液体、固体培养基,MS固体培养基以及1/2MS固体培养基配制完成后置于120 ℃高压灭菌锅消毒20 min,冷却后置于4 ℃冰箱中保存备用.NLN液体培养基需在超净工作台上用过滤器进行过滤灭菌,分装在三角瓶中,封口保存.

1.2.2 统计方法 胚状体诱导率等于胚状体数/花蕾数×100%

芥蓝论文参考资料：

结论：芥蓝小孢子培养初报为关于芥蓝方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关粗大的芥兰梗的做法论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。