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关于基因克隆论文范文资料 与桃果实CyPD基因克隆、生物信息学分析蛋白表达有关论文参考文献

版权:原创标记原创 主题:基因克隆范文 科目:硕士论文 2024-03-01

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摘 要:线粒体膜通透性转换孔(MPTP)是线粒体内膜上的一种蛋白复合体,在细胞凋亡或坏死中具有重要作用.亲环蛋白D(CyPD)是MPTP的重要组成蛋白,对线粒体引起的细胞凋亡有重要的调节作用,但植物中该蛋白的研究较少.本试验通过PCR、RACE等分子生物学技术克隆获得了肥城桃果实线粒体CyPD基因cDNA序列,该序列全长663 bp,开放阅读框为615 bp,编码204个氨基酸;系统进化树分析发现,肥城桃CyPD和苹果CyPD蛋白在进化关系上最为亲密;蛋白质三维结构模拟表明,该蛋白含有2个α螺旋、8个β折叠结构;体外构建了pET-32a-CyPD重组表达载体,并成功在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.这些结果为进一步研究CyPD蛋白的结构和功能奠定了基础.

关键词:肥城桃;线粒体;CyPD;基因克隆;蛋白表达

中图分类号:S662.1:Q78 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2017)08-0007-05

Abstract Mitochondrial membrane permeability transition pore (MPTP) is a kind of protein complex playing important roles in cell apoptosis and necrosis. Cyclophilin D (CyPD) plays roles in cell mitochondria-mediated apoptosis, which is an important part of MPTP. However, there are fewer researches on CyPD in plants. In this study, the full-length cDNA of CyPD was gained by molecular biology method. It was 663 bp, contained 615 bp of the coding sequence and encoded a polypeptide of 204 amino acids. The recombinant CyPD protein was expressed in Escherichia coli. The phylogentic tree revealed that CyPD was more closely related to apple CyPD protein in evolution. The three-dimensional structure of CyPD showed that the protein contained 2 α-helix and 8 β-pleated sheets. These results would lay a foundation for studying the structure and function of CyPD protein further.

Keywords Feicheng peach; Mitochondria; CyPD; Gene clone; Protein expression

线粒体是一种具有双层膜结构的半自主细胞器,除具有能量转化、三羧酸循环、氧化磷酸化及儲存钙离子等功能外[1-5],还参和细胞凋亡、细胞分化和细胞信息传递等过程[6-8].细胞凋亡是细胞的一种基本生物学现象,是自主有序的、多基因严格控制的过程[9].Bcl-2基因的发现使人们认识到细胞凋亡过程的复杂性[10],随着对细胞凋亡的深入研究,人们逐步认识到细胞凋亡有三条途径:膜受体途径、内质网途径和线粒体途径[11-13].

线粒体通透性转换孔(MPTP)是线粒体上的一个特殊孔道.MPTP开放被认为是线粒体导致细胞死亡的众多途径中关键的一个,是细胞凋亡的限速步骤[14].有研究表明,构成MPTP的主要蛋白包括:线粒体腺嘌呤核苷酸转运体(adenine nucleotide translocator,ANT)、亲环蛋白D(cyclophilin D,CyPD)、电压依赖型阴离子通道(voltage dependent anion channel,VDAC)、F0F1-ATP酶(ATP synthase)以及磷酸盐载体(phosphate carrier,PiC)[15,16].

CyPD是CyP蛋白家族的线粒体表型,是一种水溶性蛋白,有207个氨基酸,分子量约为20 kD.CyPD的N端有一段信号序列,使其定位于线粒体基质中,蛋白转运到线粒体后这段序列被切除[17].CyPD在植物体生长和发育调节、代谢调控以及逆境应答方面均发挥重要作用,是线粒体通透性转变的主要调节元件之一.越来越多的证据显示,CyPD 参和多种因素所致的MPTP开放[18],调节线粒体相关的细胞坏死过程[19,20].

近年来,人们围绕CyPD开展了很多研究,但这些研究主要集中在动物CyPD蛋白,对植物中该蛋白的研究相对较少.本试验拟借助分子生物学手段,克隆获得肥城桃CyPD基因,对其进行生物信息学分析,并尝试体外表达CyPD蛋白,以期为进一步研究CyPD的结构和功能及在线粒体介导的细胞凋亡中的作用奠定基础.

1 材料和方法

1.1 试验材料

供试桃品种为“大红袍”(Prums persica [L.]Batsch cv. Dahongpao),采摘于山东省肥城市肥城桃基地.选取大小均匀、无机械损伤、无病虫害的七成熟果实,采摘后运回实验室,4℃下过夜预冷.桃果实切块并液氮冷冻后于-80℃保存备用.

大肠杆菌E. coli DH5α、E. coli BL21(DE3)以及含pET-32a质粒的大肠杆菌均为本实验室保存,pMD18-T Vector、PrimeScript Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit、Mini BEST Agarose Gel DNA Extraction Kit、 ARTerTM RACE 5′/3′ Kit、T4 DNA Ligase均购自TaKaRa公司.

基因克隆论文参考资料:

基因工程论文

基因和健康论文

结论:桃果实CyPD基因克隆、生物信息学分析蛋白表达为关于对不知道怎么写基因克隆论文范文课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文基因克隆的目的论文开题报告范文和文献综述及职称论文的作为参考文献资料下载。

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