原创《高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿》：本论文可用于孔雀石绿论文范文参考下载，孔雀石绿相关论文写作参考研究。
摘 要：本文主要针对高效液相色谱法测定水产品中的孔雀石绿展开了探讨,通过结合具体的试验实例,对材料和方法作了详细的阐述,并对试验结果作了分析,以期能为有关方面的需要提供参考借鉴.
关键词：高效液相色谱；测定；水产品；孔雀石绿
孔雀石绿为三苯甲烷类工业染料, 在水产养殖上可以有效的预防和治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小虫病,并能保持水产品的新鲜度.但是若人体摄入孔雀石绿,将会对健康产生极为严重的危害.因此,对水产品必要要有严格的测定,以防止孔雀石绿对人体健康带来不必要的影响.
一、材料和方法
1.试验材料.试剂有乙腈（德国默克,色谱纯）；孔雀石绿标准品（美国Sigma公司）；中性氧化铝固相萃取柱（supelco公司,1g/3mL）；滤膜（上海安谱,0.45μm,有机相）.标准溶液：孔雀石绿标准品（0.1g,Sigma）；100μg/mL标准储备液：称取孔雀石绿标准品10mg（精确到0.1mg）,用乙腈溶解并定容于100mL容量瓶中；1.0μg/mL标准中间液：吸取1.00mL标准储备液于100mL容量瓶中,用流动相定容；标准工作液：分别移取0.1、0.5、1.0、2.5、5.0mL标准中间液分装于100mL容量瓶中,用乙腈定容,制成1.0、5.0、10.0、25.0、50.0μg/L标准系列浓度.
仪器有高效液相色谱仪（LC-20AB,岛津）,配有荧光检测器；匀浆机（IKA,德国）,漩涡混合器（IKA,德国）；离心机（Sigma3K30,德国）；超声波清洗器（KQ-2200DB,昆山市超声仪器公司）；固相萃取仪（MEDIWAX,美国）；多样品自动浓缩仪（V-700,BUCHI）；超纯水器（arium ? comfort I,sartorius）.
2.色谱分析条件.色谱柱：VarianPolarisC185μm4.6mm×250mm；流动相：乙腈：乙酸铵缓冲液（80：20,v/v）；流速1.0mL/min；柱温30℃；激发波长265nm、发射波长360nm；进样量20μL.
3.样品的前处理.（1）提取.称量5.00g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中,加入15mL乙腈,漩涡混合2min,10000r/min匀浆提取30s,6000r/min离心10min,取上清液至自动浓缩样品瓶中.另取一支50mL离心管,加入15mL乙腈,清洗匀浆机刀头,洗涤液转移至前一离心管.用玻璃棒捣碎离心管中的样品,漩涡混合2min,超声波提取10min,6000r/min离心10min,上清液合并至自动浓缩样品瓶中.（2）浓缩.将上清液放入多样品自动浓缩仪,50℃下浓缩至近干,用5mL乙腈溶解残渣.（3） 净化.中性氧化铝柱用5mL乙腈活化,样液过柱,用自动浓缩样品瓶收集流出液,5mL乙腈洗涤中性氧化铝柱,合并流出液.（4）浓缩.将上清液放入多样品自动浓缩仪,50℃下浓缩至近干,乙腈定容至1mL,渦旋混匀,用0.45μm滤膜过滤,按照1.2的方法上机测定.
二、结果和分析
1.提取液的选择.标准中选择乙腈及乙酸盐缓冲液提取,同时加入盐酸羟胺和对甲苯磺酸,虽然提取效果很好,但是试验表明,仅用乙腈提取,回收率也较高.该法将提取液进行简化,减少了试剂的浪费,提高了提取效率.
2.提取方式的选择.应用《水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定（GB/T19857-2005）》,发现高效液相色谱法仅用匀浆机来提取.但试验中发现,水产品仅用匀浆机提取,其回收率较差.反复试验发现,用漩涡混合、超声波及匀浆机提取的效果好,回收率较高.
3.色谱条件的选择
（1）色谱柱的选择.基于流动相的调整上,用C18作为分离色谱柱,因其具有理想的峰形、分离度、目标峰保留时间,且应用广泛.
（2）流动相的选择.反复将乙腈和乙酸铵缓冲液的配比进行试验,发现乙腈体积分数为80%时,峰形较好,保留时间适中,且分离度理想,目标峰在11.2min出峰,杂峰都可以在15min以内流出（图1、2）.
4.标准曲线相关性、线性范围及检出限.孔雀石绿工作液浓度在1.0～50.0μg/L范围内的线性关系良好.以峰面积（Y）为纵轴,工作液浓度（X）为横轴,得到良好的线性关系,建立回归方程为Y等于37190X+10109,r2等于0.9997.按3倍信噪比计算,得出方法检出限为1.0μg/kg.
5.方法的准确度.选择鲫鱼、草鱼、河虾空白样品各1个,每个样品称取3份,分别准确加入1.0μg/mL标准中间液0.1mL,测定相关数据.上述水产品的平均加标回收率、相对标准偏差分别为89.0%～96.5%、2.0%～2.2%（表1）.
三、结论
通过试验,建立了高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿的分析方法.结果表明,选择乙腈为提取液,采用漩涡混合、超声波及匀浆机提取方式,C18柱作分离色谱柱,乙腈体积分数为80%时,分离效果较好,孔雀石绿检出限为1.0μg/L,加标回收率及相对标准偏差分别为89.0%～96.5%、2.0%～2.2%.
四、结语
综上所述,人体摄入孔雀石绿,将会对健康产生极为严重的危害.因此,对其进行测定非常必要,而在高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿的试验中,此方法能科学准确的得出孔雀石绿的含量,值得应用推广.
参考文献：
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孔雀石绿论文参考资料：
结论：高效液相色谱法测定水产品中孔雀石绿为关于孔雀石绿方面的论文题目、论文提纲、孔雀石多少钱一克论文开题报告、文献综述、参考文献的相关大学硕士和本科毕业论文。
