原创《液相色谱分析方法开发》：本文关于液相色谱论文范文,可以做为相关论文参考文献,与写作提纲思路参考。
【摘 要】 本文采用液相色谱开发新的检测方法,优化检测条件、评价检测方法,同时对新方法进行验证,使方法可行、可靠、应用性强,同时带来实际意义.
【关键词】 液相色谱 方法开发 方法评价
【DOI编码】 10.3969/j.issn.1674-4977.2015.04.001
采用液相色谱法可以分析多种不同样品里的不同组分,同一色谱条件下也可以同时分析几种甚至几十种有机物.为了提高工作效率,液相色谱新方法的开发对实际检测有着十分重要的指导意义.但是,如何快速有效的开发新方法对许多检测者来说有一定难度,许多初学者更是摸不到头绪,简单来说,一个新的液相色谱分析方法主要从分析条件的优化和检测方法的评价入手.
1 分析条件的优化
1.1 确定分离模式
待测物的分子量小于5000时,首先看待测物是溶于有机相还是溶于水相,一般来说,待测物溶于有机溶剂的（正己烷除外）采用反向模式,待测物溶于水也采用反向模式.当待测物的分子量大于5000时,溶于有机物的待测物采用溶胶渗透方式,溶于水的待测物选用凝胶过滤方式.
1.2 色谱条件的确定
（1）色谱柱的选择.色谱柱可根据待测物的化学性质选择,最开始尽量选择万能色谱柱,既分析成功可能性最高的色谱柱,但当分离效果不好时,要根据待测物性质,更换其它类型色谱柱.现在大部分液相色谱分析都使用反相液相色谱柱,例如C18色谱柱可用于分析多种添加剂、药物等,是性价比十分高的色谱柱,蛋白质的分析可采用大孔径C8柱,这两种色谱柱之所以运用广泛是因为在大多数情况下,使用这两种色谱柱都可以达到很好的分离效果.另外,新的柱子在进行启用时要注意活化,仔细阅读色谱柱说明书,按照色谱柱保存溶液活化色谱柱2h～3h,流速由低到高.采用柱效报告中分析条件对标样进行分析,观察柱效、压力和基线.在日常使用中,做 谱柱的维护,以延长使用寿命.
表1 不同色谱柱的特点
（2）流动相的选择.流动相最好选用溶剂对于待测样品有合适的极性和良好的选择性,最好是色谱纯,由于高效液相色谱仪灵敏度高,对流动相溶剂的纯度也要求高,不纯的溶剂会引起基线不稳.同时流动相的化学稳定性要好,不能选和待测物发生反应或聚合的溶剂.另外,流动相黏度要适中,若使用高黏度溶剂,势必增高柱子压力,不利于分离,但黏度过低的溶剂也不宜采用,它们易在色谱柱或检测器内形成气泡,影响分离.同时不要采用极端pH值流动相,极高或极低的pH值流动相会影响色谱柱的使用寿命.
表2 常用流动相的溶剂性质
（3）检测波长的选择.使用紫外分光光度计进行扫描,得到待测物质的最大吸收波长,然后取强降解实验破坏较严重的样品（产生较多杂质）,按照已初步拟定的色谱条件,在全波长或二极管阵列检测器下进行待测物质测定,分析其3D图谱,看在该物质的最大吸收波长下,杂质是否也有吸收,以保证你选择的波长兼顾样品及其可能产生的杂质.
（4）检测器的选择.没有一种液相色谱检测器适于检测所有有机物,理想的检测器应做到灵敏度高、尽可能忽略基线噪声、具有宽的线性范围、能独立于流动相及操作参数的响应并能保持长时间的操作稳定性.可根据待测物选择紫外检测器、二极管阵列检测器、荧光检测器、示差折光检测器等来尽可能满足理想需要.
2 检测方法的评价
2.1 待测物的定性和定量
一般采用待测物的保留时间定性,峰高或峰面积定量,可通过制定混合待测物标准曲线来确定样品中待测物含量,混合标准曲线要至少制定四点,并且线性良好.
2.2 准确度和精密度的确定
通过向空白样品中添加标准物质来计算待测物在样品中的回收率,以回收率的结果来判定该方法的准确度,一般来说方法的回收率应该在95%～105%之间.对于精密度的测定可以采取相同检测条件下做重复试验来计算相对标准偏差,相对标准偏差等于标准偏差/计算结果的算术平均值×100%,对于药物分析,相对标准偏差要在2%以内（重复六次实验）.
2.3 检测限和定量限的确定
检测限是指分析方法在规定的实验条件下所能检出被测组分的最低浓度或最低量,定量限是指分析方法可定量测定样品中待测组分的最低浓度或最低量.液相色谱法采用以三倍信噪比所对应的浓度为检测限,以十倍信噪比所对应的浓度为定量限.一个好的分析方法其检测限相对较高.
2.4 比对试验
为了对方法进行有效验证,应在不同实验室不同人员之间对已知浓度的盲样进行检测,比对实验数据,看方法是否可靠,也可采用以此方法和其他方法（国标方法）对盲样检测,比对结果,看实验数据是否在可信范围内.
综上所述,一个好的液相色谱分析方法不仅要有完备的检测条件,同时应对日常检测有一定实际意义.在新方法的开发过程中,需要不断对检测条件进行摸索,在实践中积累经验,对方法进行有效验证,这样才能制定出完美的检测方法.
作者简介
王欣婷,助理工程师,主要从事食品检测相关工作.
（责任编辑：张晓明）
液相色谱论文参考资料：
结论：液相色谱分析方法开发为大学硕士与本科液相色谱毕业论文开题报告范文和相关优秀学术职称论文参考文献资料下载，关于免费教你怎么写液相色谱保护柱方面论文范文。
