原创《小麦腐霉根腐病原鉴定Ⅰ》：本论文主要论述了小麦论文范文相关的参考文献,对您的论文写作有参考作用。
摘 要：2015年冬小麦返青期,山东省青岛市、临沂市的冬小麦出现缺苗断垄现象,叶片出现萎蔫症状,植株矮小,生長不良,毛细根上出现似开水烫过样水渍状病斑,重者小麦根系及茎基部变褐.本研究对其病原菌进行分离培养、致病性测定、形态学观察及分子生物学鉴定.结果表明,引起两地冬小麦根腐病（称为腐霉根腐病）的病原菌为刺腐霉（Pythium spinosum）,该病原菌菌落白色,菌丝发达,分枝繁茂.该研究结果可为冬小麦腐霉根腐病防治提供科学依据.
关键词：腐霉根腐病； 刺腐霉； 冬小麦
中图分类号：S435.121.4+7 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2017）08-0104-04
Abstract A disease was observed on winter wheat in Qingdao and Linyi regions of Shandong Province in 2015. The infected wheat showed wilt leaves, water-soaked roots and dwarf plants, and the seriously infected ones had browned roots and stem bases. Two Pythium-like strains were isolated from the infected wheat roots. Based on their morphology biological characteristics, pathogenicity and ITS sequences, the two strains were all identified as P. spinosum. The colonies were white on CMA, and mycelia developed well. The research results could provide scientific bases for prevention and control of wheat pythium root rot.
Keywords Pythium root rot； P. spinosum； Winter wheat
由腐霉菌引起的小麦根腐病（小麦腐霉根腐病）是世界性病害,现全国均有分布.小麦受到腐霉菌Pythium spp.侵染后,根系常表现为变褐腐烂,地上部分生长不良,产量降低,种子和幼苗在出土前就可霉烂和死亡.我国东北、西北春麦区发生重,黄淮海冬麦区也发生普遍.近年来,山东青岛和临沂莒南地区返青后冬小麦叶片变黄,呈点片发生,发病轻的植株根尖水渍状,似开水烫过,地上部分生长不良.本研究通过病原菌分离、致病性测定、形态学观察并结合腐霉菌株rDNA-ITS序列比对结果,明确引起该地区冬小麦根腐病（称其为小麦腐霉根腐病）的病原菌,以期为该病害发生规律的探究和综合防治措施的制定提供理论依据.
1 材料和方法
1.1 病害调查和症状观察
2014年2—3月在山东省青岛市农业科学研究院冬小麦试验田和莒南县冬小麦地,对小麦腐霉根腐病的发生和危害情况进行调查,观察记载田间病株症状,采集具有典型症状的冬小麦植株.
1.2 病原菌的分离、培养及纯化
本试验采用组织分离法从具有典型症状的冬小麦根部分离病菌.将病株水渍状细毛根剪成0.5～1.0 cm小段,用自来水冲洗24 h,0.05%次氯酸钙消毒10 min,放入WA平板28℃培养24～48 h,采用单孢分离法进行纯化,转移到CMA培养基上,将纯化好的菌株SDQD-1和SDJN-1保存备用.
WA培养基：琼脂粉18 g,用去离子水混合配制1 000 mL.
CMA培养基：玉米粉60 g,60℃水浴2 h,过滤取滤液,琼脂粉18 g,用去离子水混合配制1 000 mL.
1.3 致病性测定
将SDQD-1和SDJN-1转移到CMA平板上28℃暗培养7～10 d.将沙土和塑料盆用甲醛消毒.将培养好的SDQD-1和SDJN-1菌株接种到灭菌玉米粒上培养7～10 d,制成菌剂.菌剂和灭菌沙土以质量比5∶100混合均匀,装入消毒塑料盆.取健康小麦种子（品种为济麦22）催芽后种植在塑料盆内,每盆种植10粒,10～15℃培养.对照采用灭菌玉米粒.待小麦叶片出现萎蔫症状时,观察小麦植株发病情况,并将根取出,观察并记录根发病情况.取有水渍症状的根,分离致病菌,观察和接种菌是否一致.
1.4 病原菌形态观察
将腐霉菌株在CMA培养基上培养7 d,观察菌落形态特征.将SDQD-1和SDJN-1在WA平板上暗培养2 d后移取边缘菌丝至皮氏（Petris）培养液中,28℃培养2～5 d挑取孢子囊,观察孢子囊形态,测量孢子囊大小.待出现藏卵器、雄器、卵孢子后,观察并记录藏卵器及雄器的形态和着生位置、配合情况及卵孢子的形态特征.每项指标分别观察测量50个.
1.5 病原菌分子生物学鉴定
1.5.1 病原菌DNA提取 将供试菌株接种到CMA培养基上,25℃培养5 d,收集菌丝.采用CTAB法提取和纯化基因组DNA,并置于-20℃冰箱中备用.
1.5.2 ITS基因扩增 PCR反应在ABI 2720 PCR仪上进行.使用50 μL PCR反应体系：缓冲液[KCl 20 mmol, （NH4）2SO4 10 mmol, MgCl2 2 mmol, Tris-HCl 20 mmol, pH 8.4]、dNTPs各200 μmol,真菌rDNA-ITS通用引物ITS1/ITS4各15 pmol,Taq DNA聚合酶（Biocolor BioScience and Technology,Shanghai, China） 2.5 units,模板DNA 100 ng.PCR反应条件：95℃预变性3 min；94℃变性40 s,54℃退火50 s,72℃延伸60 s,共35个循环；72℃延伸10 min.经1.2%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物.每次反应设不含模板DNA为阴性对照.
小麦论文参考资料：
结论：小麦腐霉根腐病原鉴定Ⅰ为适合不知如何写小麦方面的相关专业大学硕士和本科毕业论文以及关于小麦价格多少钱一斤论文开题报告范文和相关职称论文写作参考文献资料下载。
