原创《一株木薯拮抗内生细菌CEB33鉴定田间防效初步测定》：此文是一篇木薯论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
摘 要 以木薯细菌性萎蔫病病菌为靶标,从健康木薯组织中分离获得一株有较好抑菌作用的内生细菌.生理生化测定、形态观察及16S rDNA序列分析表明其为类芽孢杆菌属.拮抗试验表明该菌株对木薯细菌性萎蔫病菌、疫霉根腐病菌、棒孢霉叶斑病菌和胶孢炭疽病菌均有较强的抑制作用.田间防控试验表明该菌株对木薯细菌性萎蔫病有较好的防治效果,具有良好的开发前景.
关键词 木薯；拮抗内生细菌；类芽孢杆菌属
中图分类号 S435.33 文献标识码 A
木薯（Manihot esculenta Crantz）为大戟科（Euphorbiaceae）木薯属灌木状多年生作物,是和马铃薯、甘薯并称的三大薯类作物之一,是世界上10亿人口日常生活中所需热能的主要来源.木薯块根富含淀粉,在粮食、饲料加工、工业原材料等方面均有广泛的用途[1].木薯适应性强,耐旱耐瘠,主要分布在中南美洲、非洲、东南亚等热带地区和部分亚热带地区.我国木薯主产区集中在广西、广东、海南、云南和福建5个省（区）,湖南、四川、贵州和江西等省也有少量栽培[2].近年来,我国一直是世界上最大的木薯进口国[3],国内木薯生产对相关产业的可持续发展具有重要意义.
和其它作物类似,各类严重发生的病害是木薯相關产业发展的限制性因素之一.细菌性萎蔫病,也称细菌性枯萎病,是国内木薯生产中危害最为严重的病害,可造成30%以上的产量损失[4].疫霉根腐病、棒孢霉叶斑病和炭疽病也是我国木薯中的常见病害[5-7].目前,国内对于木薯病害的防控主要依靠化学农药进行防治,成本高且污染环境.生物防治是未来木薯病害防控技术研究的主要方向,但相关研究还很少,特别是木薯内源拮抗微生物筛选方面尚无相关研究.笔者们在前期研究基础上,开展了木薯拮抗内生菌的分离筛选和鉴定工作,获得了一株对主要木薯病害病原菌有较强拮抗能力的内生细菌,本文为主要研究结果.
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 木薯组织样品和病原菌菌株 健康木薯品种华南5号叶片样品来自中国热带农业科学院环境和植物保护研究所儋州试验基地.木薯细菌性萎蔫病菌（Xanthomonas axonopodis pv. manihotis）菌株GX11、木薯疫霉根腐病菌（Phytophthora palmivora）菌株CPPHN01、棒孢霉叶斑病菌（Corynespora cassiicola）菌株CCCHN01、胶孢炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides）菌株CCGHN01、大肠杆菌（Escherichia coli）菌株JM019、多粘类芽孢杆菌（P. polymyxa）菌株ATCC 842T均由中国热带农业科学院环境和植物保护研究所提供.
1.1.2 供试培养基和试剂 病原真菌菌株培养采用PDA培养基,细菌培养采用LB培养基,配方参见《植病研究方法》[8]；DN 段回收试剂盒和pMD18-T载体购买自宝生物工程（大连）有限公司；Taq酶、dNTP和大肠杆菌TOP10感受态细胞购买自天根生化科技（北京）有限公司；引物799F（59-AACAGGATTAGATACCCTG-3′）和1492R（5′-TACG
GCTACCTTGTTACGAGTT-3′）,由北京六合华大基因科技股份有限公司合成；其它试剂为国产分析纯.
1.2 方法
1.2.1 内生细菌的分离和筛选 参照付业勤等[9]的方法,对木薯叶片样品进行表面消毒后进行内生细菌的分离和纯化.菌株的筛选参照潘羡心等[10]的对峙培养法,用木薯细菌性萎蔫病菌作为靶标菌.
1.2.2 内生细菌抑菌作用评价 菌株对木薯细菌性萎蔫病菌的抑制作用采用牛津杯法进行.将木薯细菌性萎蔫病菌培养至OD600约0.6,按照1 ∶ 20的比例将菌液和灭菌后冷却至45 ℃的NA培养基混匀后制备带菌平板.参照潘羡心[10]的方法,制备内生细菌的无菌滤液,将牛津杯放置在带菌平板的 ,加入0.2 mL的滤液,以液体NA培养基为对照,重复3次.28 ℃培养2 d后观察抑菌情况,测量抑菌圈直径.
采用对峙培养法评价内生细菌对木薯疫霉根腐病菌、棒孢霉叶斑病菌和胶胞炭疽菌的抑菌作用.将病原菌菌饼接种在PDA平板的 ,将内生细菌在菌饼两侧约3 cm处进行划线接种,28 划培养7 d后,测量菌落直径,计算菌落生长抑制率.
1.2.3 内生细菌菌株鉴定 参照《常见细菌系统鉴定手册》[11]和《微生物学实验》[12]观察菌株CEB33的培养形态、性状、革兰氏染色反应,同时测定菌株的生理生化特征.参照潘羡心[13]的方法进行菌株16S rDNA序列的测定和分析.从数据库中下载近源物种的16S rDNA序列,应用MEGA version 4.0中的NJ（Neighbor-Joining）方法生成系统树,用Bootstrap 对系统树进行检验,1 000次重复.
1.2.4 内生细菌内生性测定 参照陈博[14]的方法,用含有氨苄青霉素的液体NA培养基对内生细菌菌株进行诱导培养,最终获得对氨苄青霉素具抗性的突变菌株.用针刺法将抗性标记菌株接种在木薯华南5号植株的健康叶片上,分别用大肠杆菌菌株JM019和无菌水做对照.28 ℃培养5 d后,取距离接种针刺点约1 cm的叶片组织,参照1.2.1的方法进行内生细菌的分离和鉴定.
1.2.5 内生细菌对木薯细菌性萎蔫病的田间防控试验
选择地势平坦,土质疏松,土壤肥力中等,上一茬种植木薯且细菌性萎蔫病发生较严重的田块进行.供试木薯品种为华南9号.试验共设3个处理和1个空白对照：CEB33菌液（OD600 0.6）、可杀得叁千（46%氢氧化铜WDG,美国杜邦公司生产,稀释1 500倍）、净刹（80%乙蒜素EC,河南科邦化工有限公司生产,稀释3 000倍）及空白对照（清水）,每个处理重复3次,共12个小区,小区面积100 m2,小区间设3行保护行,木薯行距100 cm,株距60 cm.
木薯论文参考资料：
结论：一株木薯拮抗内生细菌CEB33鉴定田间防效初步测定为关于对写作木薯论文范文与课题研究的大学硕士、相关本科毕业论文木薯淀粉价格论文开题报告范文和相关文献综述及职称论文参考文献资料下载有帮助。
