原创《霍山石斛PMM基因克隆其表达分析》：此文是一篇基因克隆论文范文,为你的毕业论文写作提供有价值的参考。
摘 要 为研究磷酸甘露糖变位酶基因（PMM）的功能及其在多糖生物合成中的表达调控机制,以霍山石斛原球茎为材料,利用RT-PCR技术,克隆PMM基因,对其 cDNA序列和表达情况进行分析.结果显示：霍山石斛PMM基因cDNA序列长949 bp,包含一个747 bp的开放阅读框,共编码248个氨基酸,GenBank中的登录号为KY912084.生物信息学分析表明：该蛋白属于HAD超家族,可能是一种稳定的、不具有信号肽和跨膜结构的亲水蛋白.系统进化树分析表明,霍山石斛PMM和铁皮石斛、海枣、油棕、芦笋亲缘关系较近,处于同一分支.qPCR结果显示：PMM基因在茎中的相对表达量最高；在4種不同药用石斛比较中,鼓槌石斛的相对表达量最高,霍山石斛的表达量最低.本研究结果表明PMM基因可能不仅参和到石斛多糖的合成,还和其它化合物的生物合成相关.
关键词 霍山石斛；PMM基因；克隆；qPCR
中图分类号 S682.31 文献标识码 A
Abstract In the stusy, the cDNA sequence of PMM gene was isolated from the protocorm by RT-PCR, and its expression level was analyzed to elucidate the function of phosphomannomutase gene and its role during polysaccharides biosynthesis. The results showed that the length of PMM gene（accession number was KY912084 in GenBank）was 949 bp, containing a 747 bp open reading frame encoding 248 amino acids. Bioinformatics analysis showed that the protein belonged to HAD superfamily and might be a kind of hydrophily and stable protein, which had no signal peptide and transmembrane structures. The phylogenetic tree analysis showed that the protein had closer relationship with Dendrobium catenatum, Phoenix dactylifera, Elaeis guineensis and Asparagus officinalis, which at the same branch. qPCR results indicated that PMM gene was highly expressed in the stem and the relative expression of PMM gene was the highest in Dendrobium chrysotoxum and the lowest in Dendrobium huoshanense in the comparison of the four different medicinal dendrobium. The results suggested that PMM gene may not only be involved in the synthesis of dendrobius polysaccharide, but also related to the biosynthesis of other compounds.
Key words Dendrobium huoshanense； PMM gene； cloning； qPCR
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2017.12.020
霍山石斛（Dendrobium huoshanense）,又名米斛,是兰科石斛属多年生草本植物,更是众多保健药品和保健食品的主要来源之一[1-3],是石斛属植物中药用价值较高的一种石斛[4].由于霍山石斛对生长环境要求十分苛刻,自然繁殖效率极低,加上人工的长期采挖,其野生资源已难觅踪迹[5].基因工程技术能够为植物的改良提供理论依据和物质基础,近几十年来,对霍山石斛进行了大量的研究,特别是组织培养技术取得了较大的进展[6-7],但在基因工程研究方面,有关霍山石斛的报道还较少.石斛多糖是石斛属植物的主要有效成分之一[8-9],因此通过基因工程手段提高石斛多糖的含量具有重大意义.
石斛中的多糖主要由葡萄糖和甘露糖等单糖组成,从兜唇石斛中提取的多糖AP-l、AP-2和AP-3为β（l→4）连接的直连D-葡萄甘露聚糖[10]；密花石斛中分离得到的均一多糖DDP-1-D也被证实为葡萄甘露聚糖,主要由D-葡萄糖和D-甘露糖按3.01 ∶ 1的比例组成[11]；从流苏石斛分离获得的3种均一性多糖,经结构鉴定发现这3种多糖都是由葡萄糖和甘露糖按不同比例构成的[12]；袁晨琳[13]从霍山石斛中分离得到七种组分多糖,它们均由葡萄糖、半乳糖和甘露糖以不同的摩尔比组成.磷酸甘露糖变位酶（Phosphomannomutase,PMM）属于一类新型的磷酸转移酶,能够催化D-甘露糖-6-磷酸和D-甘露糖-1-磷酸之间的相互转变,为合成GDP-甘露糖提供底物[14].而GDP-甘露糖作为甘露糖供体参和到抗坏血酸、细胞壁多糖、含甘露糖的多糖、糖基化蛋白、褐藻胶和岩藻聚糖等的生物合成中[15-18].目前有关磷酸甘露糖变位酶的研究在真菌[19-21]、动物[22-23]、植物[24-25]中均有报道,但在霍山石斛中还未见任何报道.本研究以霍山石斛原球茎为材料,克隆了PMM基因,对其cDNA序列进行分析,并利用qPCR技术检测了霍山石斛不同组织及不同品种药用石斛中PMM基因的表达情况,为后续研究磷酸甘露糖变位酶的功能以及石斛多糖合成代谢提供理论基础.
基因克隆论文参考资料：
结论：霍山石斛PMM基因克隆其表达分析为关于基因克隆方面的的相关大学硕士和相关本科毕业论文以及相关基因克隆技术的原理论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料下载。
